Analisi comparativa del quadro proteico, identificazione e quantificazione di allergeni in cultivar di pesco

Le caratteristiche biochimiche e nutrizionali di un frutto sono legate al suo proteoma, che dipende dal patrimonio genetico. Cultivar diverse di una stessa specie possono essere caratterizzate da variazioni qualitative e quantitative, più o meno evidenti, a carico delle diverse componenti proteiche. In questo lavoro sono descritti i dati ottenuti da un’analisi comparativa (i) del quadro delle proteine totali e (ii) della quantità della proteina allergenica 'lipid transfer protein' (LTP) in 5 cv di pesco. Gli estratti proteici sono stati preparati separando polpa e buccia delle cultivar in esame [cv Maria Cristina (pesca a polpa bianca), cv Ionia (pesca percoca), cv Crimson Lady (pesca a polpa gialla), cv Neve (nettarina a polpa bianca), cv Stark Saturn (platicarpa)] provenienti da un campo sperimentale del Cra-Urf di Caserta.

L’analisi mediante SDS-PAGE ha mostrato che la composizione del quadro proteico differisce significativamente sia in relazione al tipo di tessuto analizzato (polpa, buccia) che alla cultivar. L’allergene LTP è stato isolato mediante cromatografia a fase inversa per HPLC, è stato identificato mediante sequenziamento automatico della regione N-terminale e ne è stata stimata la concentrazione. I risultati ottenuti mostrano un elevata quantità di LTP nella buccia mentre nella polpa, se presente, essa è al di sotto del potere risolutivo della tecnica utilizzata. Fra le cultivar analizzate la nettarina Neve ha mostrato la minor concentrazione di LTP/g di sostanza secca mentre le cv Stark Saturn e Crimson Lady risultano le più ricche di allergene. 

Un’analisi preliminare mediante elettroforesi bidimensionale e immunoblotting dell’estratto proteico da polpa di platicarpa mostra almeno 10 segnali positivi indicanti proteine potenzialmente allergeniche che hanno legato IgE presenti nel pool di sieri utilizzato. Le proteine IgE-leganti identificate verranno caratterizzate mediante saggi immunologici in vitro e in vivo (skin test, test di attivazione dei basofili, proliferazione linfocitaria) per valutarne la loro attività biologica complessiva nei confronti del sistema immunitario umano in corso di patologia allergica.

Farina L.^1,4, Buccheri M.¹, Tuppo L.², Tamburrini M.², Palazzo P.³, Giani M. ³, Bernardi M.L.³, Mari A.3, Damiano C.¹, Ciardiello M.A²

1 Cra, Unità per la Ricerca in Frutticoltura, via Torrino 3, 81100 Caserta; 

2 Istituto di Biochimica delle Proteine, CNR, Via P. Castellino 111, 80131 Napoli; 

3 Centro di Allergologia Clinica e Sperimentale, IDI-IRCCS, Via dei Monti di Creta 104, 00167 Roma;

4 Seconda Università degli Studi di Napoli, via Vivaldi 43, 8110 Caserta.